ChIP實(shí)驗原理：是在活細胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復合物，并將其隨機切斷為一定長(cháng)度范圍內的染色質(zhì)小片段，然后通過(guò)免疫學(xué)方法沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段，通過(guò)對目的片段的純化與檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。
1.細胞交聯(lián) Crosslinking
目的：通過(guò)甲醛交聯(lián)將蛋白質(zhì)與DNA結合固定，形成穩定的復合物。
步驟：向細胞培養基中加入甲醛（通常濃度為1%），孵育10-15分鐘。加入甘氨酸終止交聯(lián)反應。收集細胞，用預冷的PBS洗滌
2.細胞裂解 Cell Lysis
目的：裂解細胞，釋放染色質(zhì)
步驟：使用含有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液裂解細胞。
離心收集細胞核。
3.染色質(zhì)打斷 Chromatin Shearing
目的：將染色質(zhì)打斷成200-1000 bp的片段，便于后續免疫沉淀。
步驟：（注意打斷后需通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳或生物分析儀檢測片段大小。）
超聲打斷：使用超聲儀將染色質(zhì)打斷。
酶解法：使用微球菌核酸酶（MNase）消化染色質(zhì)。
4.免疫沉淀 Immunoprecipitation, IP
目的：利用特異性抗體捕獲目標蛋白-DNA復合物。
步驟：將染色質(zhì)片段與目標蛋白的特異性抗體孵育（通常過(guò)夜）。加入Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠，捕獲抗體-蛋白-DNA復合物。洗滌磁珠，去除非特異性結合。
5.解交聯(lián) Reverse Crosslinking
目的：釋放DNA，便于后續分析。
步驟：加入含有蛋白酶K的解交聯(lián)緩沖液，65℃孵育數小時(shí)或過(guò)夜。加熱使蛋白質(zhì)變性，釋放DNA。
6.DNA純化 DNA Purification
目的：純化DNA，去除蛋白質(zhì)和RNA。
步驟：使用酚-氯仿抽提或商業(yè)化的DNA純化試劑盒。通過(guò)乙醇沉淀或離心柱法回收DNA。
7.DNA分析 DNA Analysis
目的：檢測目標DNA片段。
方法：qPCR：定量檢測目標DNA片段的富集程度。
測序（ChIP-seq）：高通量測序分析全基因組范圍內的蛋白質(zhì)結合位點(diǎn)。
ChIP實(shí)驗的關(guān)鍵點(diǎn)：
抗體特異性：抗體的質(zhì)量直接影響實(shí)驗結果，需選擇經(jīng)過(guò)驗證的高特異性抗體。
染色質(zhì)打斷：片段大小需控制在200-1000 bp，過(guò)大或過(guò)小都會(huì )影響免疫沉淀效率。
對照設置：包括Input對照、IgG對照等，確保實(shí)驗結果的可靠性。
ChIP實(shí)驗雖然步驟較多，但通過(guò)優(yōu)化條件和選擇合適的工具（如高效的DNA打斷儀），可以顯著(zhù)提高實(shí)驗效率和成功率。
傳統超聲打斷法存在諸多痛點(diǎn)：
操作繁瑣，耗時(shí)耗力：需要反復摸索超聲條件，耗時(shí)長(cháng)達數小時(shí)。
樣本損失大，重復性差：超聲過(guò)程中容易產(chǎn)生熱量，導致樣本降解，實(shí)驗結果不穩定。
難以處理微量樣本：傳統方法對樣本量要求高，難以滿(mǎn)足微量樣本的實(shí)驗需求。
別擔心！這款凈信DNA打斷儀，專(zhuān)為ChIP實(shí)驗量身打造！
高效便捷，省時(shí)省力：采用獨特的非接觸超聲波DNA打斷技術(shù)，利用超聲波的能量，通過(guò)非接觸的方式對DNA樣品進(jìn)行打斷，從而得到所需的DNA片段，效率提升數倍！
①溫和打斷，保護樣本完整性： 精確控制能量輸出，避免熱效應，最大程度保護DNA完整性，確保實(shí)驗結果準確可靠。
②微量樣本，輕松應對：可處理微量樣本，滿(mǎn)足各種實(shí)驗需求。
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